史培华测试版2013留存
水稻植株可溶性总糖测定
一、 器材准备：
25ml容量瓶、10ml离心管、25ml刻度管、96孔酶标板、定量加液器2个。
二、实验过程：
1、提取：称样0.1（0.0991-0.1009）克，加8ml浓度为80%的乙醇于10ml离心管中，搅拌。80℃水浴30分钟，3000rpm离心10min，倒出上清液于25ml容量瓶中，加8ml（可适量降低ml数，以防润洗过量，后期定容时已超过刻度线）80%乙醇，80℃水浴30分钟，3000rpm离心10min，倒出上清液，共提取三次。定容25ml。
2、测定：吸出提取液0.1ml于25ml刻度管，加5ml硫酸蒽酮溶液，90℃煮15分钟，冷水浴冷却后，可使用分光光度计或酶标仪在620nm下比色，切记比色的溶液冷却后要摇匀。
三、溶液配制： 蒽酮硫酸溶液：150毫克蒽酮溶于100ml稀硫酸（76ml浓硫酸加入30ml水中，）；建议使用500ml 98%的硫酸加入197.5ml蒸馏水，散热到手可触碰时及时加入0.9868g的蒽酮。
80%的酒精：8瓶500ml的酒精中加入1L蒸馏水，摇匀。
四、标准曲线制定
葡萄糖105℃6小时烘干，称取0.2g溶于1L蒸馏水，即为200ppm（μg/ml），移液吸取溶液0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1ml于25ml刻度管，加水1、0.9、0.8、0.6、0.4、0.2、0ml，即各溶液补齐到均为1ml，由此各刻度管中溶液的葡萄糖浓度分别为：0、20、40、80、120、160、200μg/ml；加5ml硫酸蒽酮溶液，90℃煮15分钟，冷水浴冷却后在620nm下比色。建议三次重复！！！每个浓度下3个重复的OD值求平均值，而后以横坐标为葡萄糖浓度梯度，纵坐标为OD值绘制标准曲线，一般线性拟合后R2可达0.99以上。
五、计算方法
可溶性总糖含量（%）=[(C*V/A)/(W*106)]*100
C—从标准曲线查得的糖量（μg） V—样品提取液的总体积（ml）
A—显色时取用的样液量（ml） W—样品干重（g） 106—g变μg 100—计算的是百分比%
可溶性总糖%=[C*25/0.1/(m*1000000)] *100
NETCIA实验室的记忆
史培华测试版2013留存
（测可溶性总糖后）总淀粉（非结构性碳水化合物）的测定
一、器材准备：
25ml容量瓶、10ml离心管、25ml刻度管、96孔酶标板、定量加液器3个
二、实验过程：
1、提取：将测糖剩余的样品在烘箱里烘干（或在80℃水浴锅中加热），待样品中的酒精散去。加2ml水，100℃水浴15min，冰水浴冷却后加9.2N高氯酸2ml，不时搅拌，静置反应15min，再加水4ml，3000转离心10min，上清液转移至25ml容量瓶，转移时用蒸馏水润洗。再加2ml4.6N高氯酸，不时搅拌，100℃水浴15min再加6ml水，3000转离心10min，上清液转移至25ml容量瓶。加8ml（看润洗情况可适量减少ml数，以防超过25ml的刻度线）水清洗溶液，搅拌，3000转离心10min，上清液转移至25ml容量瓶。共提取三次，定容25ml。 2、测定：吸出提取液0.1ml于25ml刻度管，加5ml硫酸蒽酮溶液，90℃煮15分钟，冷水浴冷却后，可使用分光光度计或酶标仪在620nm下比色，切记比色的溶液冷却后要摇匀。
三、溶液配制： 蒽酮硫酸溶液：150毫克蒽酮溶于100ml稀硫酸（76ml浓硫酸加入30ml水中，）；建议使用500ml 98%的硫酸加入197.5ml蒸馏水，散热到手可触碰时及时加入0.9868g的蒽酮。
高氯酸的配制：高氯酸在配制时可在冷水浴中，在烧杯中加入适量蒸馏水再缓缓倒入高氯酸，散热后转移至1L容量瓶，而后定容至1L，摇匀。 9.2N 高氯酸：793ml 70% 高氯酸定容至1L 4.6N 高氯酸：397ml 70% 高氯酸定容至1L
四、标准曲线制定
可溶性淀粉105℃6小时烘干，称取0.1g（淀粉样品很难溶，可在烧杯中加水慢慢溶解）溶于100ml蒸馏水，即为1000ppm（μg/ml），移液吸取溶液0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1ml于25ml刻度管，加水1、0.9、0.8、0.6、0.4、0.2、0ml，即各溶液补齐到均为1ml，由此各刻度管中溶液的葡萄糖浓度分别为：0、100、200、400、600、800、1000μg/ml；加5ml硫酸蒽酮溶液，90℃煮15分钟，冷水浴冷却后在620nm下比色。建议三次重复！！！每个浓度下3个重复的OD值求平均值，而后以横坐标为葡萄糖浓度梯度，纵坐标为OD值绘制标准曲线，一般线性拟合后R2可达0.99以上。
五、计算方法
可溶性总淀粉含量（%）=[(C*V/A)/(W*106)]*100
NETCIA实验室的记忆
史培华测试版2013留存
C—从标准曲线查得的糖量（μg） V—样品提取液的总体积（ml）
A—显色时取用的样液量（ml） W—样品干重（g） 106—g变μg 100—计算的是百分比%
可溶性总淀粉%=[C*25/0.1/(m*1000000)] *100
若使用葡萄糖标准曲线（淀粉很难溶解，为防止不溶解给标准曲线带来误差），公式可为：
可溶性总淀粉含量（%）=0.9*[(C*V/A)/(W*106)]*100 0.9——由葡萄糖换算为淀粉的系数。
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