维普资讯 http://www.cqvip.com 安徽农业科学,Joumal 0fAr,hui A .Sei.2OO8,36(9).'3688—3689 责任编辑李玮责任校对孛玮 狂犬病疫苗与干扰素ID‘2b联合应用对小鼠的保护效果 惠琦 ,付博 ,刘宏伟 ,孙敖2,王锴 ,孙平辉卜 (1.长春生物制品研究所质量保证部,吉林长春130062 ̄2.吉林迈丰制药有限公司分装车间,吉林长春130000) 摘要[目的]研究lt'bl-o2b与狂犬病纯化疫苗对小白鼠的保护效果。[方法]将IFN-o2b与狂犬病纯化疫苗按不同的免疫程序应用于6 个试验组中。1组:狂犬病疫苗腹腔注射0.5 ml/7.,0、3、7、14 d免疫;2组:狂犬病疫苗腹腔注射0.5 ml/Y'.,同时腹腔注射lt'bl-o2b 1 500 IV/只,0…3 7 14 d免疫;3:狂犬病疫苗腹腔注射0.5 ml/只…0 3 7 d免疫;4组:狂犬病疫苗腹腔注射0.5 nlL/只,同时腹腔注射lt'bl-a2b 1 500IU/只,0、3、7 d免疫;5组:狂犬病疫苗腹腔注射0.5ml/7.,0…3 7 14 d免疫,于0、1、2 d腹腔注射IF/ ̄-o2b1 500IIJ/只;6组:狂犬痛疫 苗腹腔注射0.5ml/只,0…3 7 14 d免疫,于0、1、2、3、7、14 d腹腔注射IFN-o2b1 500IV/只。3、4组于第9天攻击,1、2、5、6组于第21天攻击 后计算其保护率。[结果]狂犬病疫苗与IFN-o2b联合应用组其保护率明显高于其他组,且按免疫程序同时应用IFN-o2b组其保护率最 高。[结论]按狂犬病疫苗免疫程序同时应用IFN-a2b组其免疫效果最好,保护率最高。而提前应用IFN-o2b并没有增强狂犬病疫苗的保 护率。 关键词狂犬病疫苗;巧N.02b;保护率 中图分类号s865.1 9 文献标识码A 文章编号0517—66l1(2ee8)09一仍688—02 stI 011 U 翠Rabies Vaeme imtl lntertmla-aipha 2b for Anti-Rabies’ 哺 碰bct ofM HU1 0i etal(Char ̄htmInstJtllte ofBiological Products,Clumgchun,Jilln 130062) Abs Iobjectivel In order to o ̄rve diferelat protective efects forI ,we used Rabies Vaccine and Int ̄eron-alpha2b  ̄ati-Rabies with the diferent ways,I M甜州s lSix experiments we她n'l ̄e usinga variety ofinmile procedure.Group:1:intraperltoneal injeetlonof0.5 ml of rabies vaccine,0、 3、7、14 clays in'nni ̄on:2:rabies vaccine group while inm ̄oefitoneal injeetlon of0.5 ml of -o2b 1 500Ⅲ/only intraperitoneal injeetion,O…3 7 14 days inlalmlzation;3:intraperitoneal injection of0.5 ml of rabies vaccine group,0、3、7,tays inmmity;4:-mh t0I’阻l injection of0.5 ml of rabies vaccine group while巧’N.o2b 1 500 Iu/only intraoexito. ̄injection 0 3 7,tays inmmity;5:intralaeritoneal injection of0.5 ml of rabies vaccine 0 3 7 and 14,laysofin'nnlzalion at0、1、2 clays intrapefitoneal injection of巧’N.a2b 1 500Ⅲ/only;6:intraperitoneal injection of0.5 ml of rabies vaeeine,0, 3.7 and 14,lays ofilllllmi ̄on at 0、1、2、3、7、14 clays intrapefitoneal injection ofⅡ i’a2b 1 500 IU/only.Croup 3 and4 in the first nine days of at— tacks。Croup 1,Croup 2,Croup5,Croup6 inthefirst21 clays afterthe attack calculated theirprotectionlate.[Resull ̄]Rabies Vaccine co ̄inedwithIFN- o2b protoetion group wa8 s ti6(舶 hjg}1er than odler groups,while the rabies v ̄cination 娥dure applicaiton ofⅡ1 以b group immue best l't ̄llts. I Conclusion lThe rabies vaccination Oroee, ̄application of巧N.o2b glroup inm'lle best resuh ̄,while its protective efect懈best.Fatty appifcation of enh ̄aeed腓o2b懈no rabies vaccine protection rate. Key啊 Rabies Vaccine:lrlterferon-alpha 2b:Protective rate 理想的疫苗接种,能够刺激机体产生强而持久的特异性 免疫反应,但是目前许多疫苗接种后所激发的免疫反应,或 国药品生物制品检定所提供。启开冻干毒种,稀释成1O-2悬 液,在体重ll一13 g的小鼠脑内接种0.03 ml,连续传2—3 代,收脑时应选择4—5 d有典型狂犬病症状的小鼠。将鼠脑 研磨并加入适量含正常马血清或小牛血清的蒸馏水,制成 20%悬液,经1 000 r/rain沉淀10 min,用1O只体重l8—20 g 强度不够、或维持时间短。其原因可能与制备疫苗的抗原性 有关。最近研究表明,若在抗原注射的同时或预先注射细胞 因子,可明显增强针对该抗原的免疫应答能力…。用小鼠试 验干扰素防治狂犬病毒(cvs)感染的作用,结果表明,小鼠在 感染CVS前2周使用干扰素,可获得50%左右的保护率。干 的小鼠做病毒滴定及无菌实验,符合要求后,方可做攻击毒 用。分装小管,一70 C保存。毒力测定:将病毒悬液做1O~、 10-2 10~、扰素与狂犬病疫苗联合使用可获得比两者单独使用更佳的 保护效果,疫苗效力可提高5倍以上【2J。但IFN,a2b应用于 免疫程序的不同阶段其免疫效果是不同的,现将IFN.a2b按 10-4 10~、10-¨、10 稀释,每个稀释度脑内攻击 1O只小白鼠,0.03 ml/只,观察14 d,并记录死亡情况,统计第 5天后死亡和呈典型脑症状的小鼠数,计算LDso。 1.2.2实验步骤。 不同的方案应用于狂犬病疫苗的免疫程序中,观察对小鼠保 护效果的差别。 1材料与方法 1.2.2.1分组免疫。1组:狂犬病疫苗腹腔注射0.5 ml/只, 0、3、7、14 d免疫;2组:狂犬病疫苗腹腔注射0.5 ml/只,同时 腹腔注射IFN.a2b 1 500 IU/只,0.3、7、14 d免疫;3组:狂犬病 疫苗腹腔注射0.5 ml/只,0、3、7 d免疫;4组:狂犬病疫苗腹 腔注射0.5ml/只,同时腹腔注射IFN.a2b1 500IU/只,0、3、7 d 免疫;5组:狂犬病疫苗腹腔注射0.5ml/只,0、3、7、14 d免疫, 于0、1、2 d腹腔注射IFN.a2b 1 500 IU/只;6组:狂犬病疫苗腹 腔注射0.5ml/只,0…3 7 14d免疫,于0、1、2,3、7、14 d腹腔注 射IFN-a2b 1 500 IU/只。 1.1材料①病毒株:狂犬病毒标准攻击毒株(CVS),购自 中国药品生物制品检定所。②生化试剂:IFN.o2b(1 X lo6 IU/支),批号:20051109;Vero细胞狂犬病灭活疫苗,批号: 20051202,产自长春生物制品研究所。③主要仪器及设备:生 物净化台(SⅣ.CI Ⅱ ),安徽产;台式离心机(TG工厂16G),上海 安亨科学仪器厂。④实验动物:BALB/e小白鼠9o只,12—14 雌性,由长春生物制品研究所提供。 1.2方法 1.2.1攻击毒株CVS的制备【3J。标准攻击毒株(CVS)由中 作者简介惠琦(1976一)。女,吉林长春人,硕士,工程师。从事人类疾 病预防及生物技术研发工作。*通讯作者。 1.2.2.2分组攻击。待全程免疫后,用预先测定每0.03 ml 含5—100个LDso的病毒量脑内攻击0.03 ml/只。1、2、5、6组 于第21天病毒攻击,3、4组于第9天攻击,所有小鼠自攻击 之日起观察14 d。攻击后最初4 d内死亡的小鼠不作统计, 统计第5天后死亡和呈现典型脑病症状的小鼠数。 收稿日期2OO7.12_21 维普资讯 http://www.cqvip.com 36卷9期 惠琦等狂犬病疫苗与干扰素o2b联合应用对小鼠的保护效果 3689 1.2.2.3结果计算。要求原病毒悬液注射的小鼠80%以上死 亡,攻击用病毒含量为5~l∞个 /,0.(13 rol。统计各组小鼠的 从表2可知,第9天狂犬病毒攻击后第4组保护率明显 死亡数,计算死亡率。实验结果采用确切概率法进行分析。 高于第3组,这说明应用干扰素后能够较早地产生保护性抗 2结果与分析 体;第21天病毒攻击后,第2组(按程序联合应用IFN-o2b 2.1病毒测定结果按“1.2.1”中的方法测定病毒情况,结 组)保护率明显高于第1组(单纯应用狂犬病疫苗),第6组 果见表1。 保护率明显高于第1组,这表明联合IFN- ̄b应用能够提高 小鼠的体液免疫、细胞免疫,增强疫苗的保护效力H ;第1组 表1狂犬病毒12)∞ 与第5组,第2组与第6组,在保护率方面没有明显差别,这 嘲e 1]P.hallil ̄S vin蓐 )蜘 说明IFN—o2b在疫苗接种之前应用对保护效果影响不大,这 可能与IFN-o2b的应用剂量和短效性有关 5;同时可以看出, 当IFN-o2b的应用程序与狂犬病疫苗的免疫程序相一致时, 其保护效果最好。 3讨论 (1)狂尤病疫苗与IFN-o2b联合应用其保护率较好,且按 免疫程序同时应用IFN-o2b保护率最高。 (2)如果在新一代的无铝佐剂狂犬病疫苗中加入IFN- o2b来取代AL(0H) 佐剂,不但会增强疫苗的免疫效果,同 时会减少患者的注射痛苦【6J。这将是下一步的研究方向。 2.2 6种免疫方案对小鼠保护效果的比较用20051202批 参考文献 Veto细胞狂犬疫苗及20051109批IFN-o2b,按6组方案进行实 [1]玉 声,吴泰才,吉漓,等.狂犬病的预防与控制[M].南宁:广西科学 验,结果见表2。 技术出版社。1993:11—25. [2]卓金蓉,林小军.干 j、鼠实验[J].预防医学 表2 6种免疫方案对小鼠保护效果的比较 情报杂志,1999,15(3):129—131. Me 2 PI啪 0f oe鲳血 I曲i簋in出 脚哪 瞄 [3]邹勇,吕宏亮,宋继萍,等.狂犬病疫苗一干扰素联合制剂的免疫原性 及治疗作用[J].中国生物制品学杂志,20Q2,15(5):287—290. L4]SCI-IRADI ̄ ,SCCRAI)ER S,CLARK-LEWIS,d 81.In vitro印 mhesto ly瑚—lq懒,llt,瑚p0iesis and a 0罢 妊jis[J].Koe l ̄acl Set,1984:293— 307. [5]沈 ,周汝麟.现代免疫学实验技术[M].2版.武汉:湖北科学技术 出版社,20Q2. [6]王妍.人用疫苗佐剂的发展和应用[J].中国生物制品学杂志,2OO5,18 (3):270—272. 注:*表示差异显著。 Nole:*indicates sisra ̄ca.t difermee (上接第3687页) [3]SALEMML,HOSSAINMS.Protective effect 0fblack seed础 n Ni la sta,- 仔猪Et粮中添加25%的大蒜素200 g/t,结果表明,试验组比 five 8 ̄i.st mta'ine cytomeg-alovirus infeetlon[J].International J mal 0f Im- 对照组Et增重提高16.5%(P<0.o5),料重比降低13.O%(P Ⅻmph鲫m 0 ,2OOO,22(9):729—7加. [4] ̄,-g-秀,李同树.大蒜素对肉鸡免疫器官发育及T淋巴细胞阳性率的 <O.05),并具有驱除蚊蝇、改善舍内外环境的功效L1引。贾玉 影响[J].家畜生态学报,加 (2):88—91. 山等报道,添加大蒜素O.4 g/(d・头)有提高肉牛免疫力、增强 [5]张志勉,高海青,魏瑗.大蒜素对肿瘤患者细胞免疫功能的影响[J].山 东大学学报:医学版,∞0B,41(2):148—150. 抗病能力的作用,并对防治肉牛肠胃炎有较理想的效果L1引。 [6]殷永新.大蒜素抗肿瘤的研究进展[J].安徽农业科学,2O07,35(17): 井明艳等试验表明,在绵羊饲料中添加大蒜素1.3~1.5 5晒1—50 . [7]朱金水,将西华,陈维维,等.导向大蒜素抗大鼠胃癌分子免疫机制 g/(d・头),可提高绵羊Et增重和饲料转化率【14J。徐华君等用 [J].肿瘤,1998,18(8):222—223. 大蒜素饲喂30 Et龄新西兰白兔,试验组Et增重平均提高 [8]李有超.大蒜素对动物免疫功能影响的研究进展[J].北方牧业,2O07 (8):25. 12%,料肉比下降10%,同时减少发病率和死亡率【1 。 [9]陈志宝,张爱忠,吴海燕.大蒜素对贵妃鸡生产性能及免疫功能影响的 4小结 初步研究[J].黑龙江畜牧兽医,2oo4(4):10—11. [1O]洪伟,龚月生.大蒜素对产蛋鸡生产性能和血清生化指标的影响[J]. 综上所述,大蒜素对动物机体免疫功能具有多方面的调 动物医学进展,2006,Z6(9):85—87. 节作用,在动物生产中,大大降低了疾病的发生,应用越来越 [11]夸 芰,甄轾}铭,田萍.微生态制押F白j 搁料中应用的研究[J].粮食 与饲料工业,2000(12):36—38. 广泛。 [12]黄瑞华,王建辉,陈雯.大蒜素对断奶仔猪生长发育及其周围环境的 参考文献 ・ 影响[J].畜牧与兽医,20Q2,34(8):1—3. [13]贾玉山,格根图,董占元.大蒜i [J].科学实验研 [1]HARRIS J C,0(丌IRⅡL SL,PIJJ ̄tMER S,d 81.AI吐j 一 却r叩e柑∞0f 究,2oo4(9):13—15. 妇m 8越iⅧn(g叫Iic)[J].Applied腼∞口bid0 and Biotedmology,2001,57 [14]井明艳,孙建义.沙葱、地椒和大蒜素对绵羊体增重效果的影响[J].饲 (3):282—286. 料广角,2oo4(11):33—34. [2]DONALDL,IANN,DALEl:t,d a1. m imⅡ mpetelaeeby mtic:l ̄ [15]徐华君,李莉,张露文.大蒜素在家兔生产中的应用[J].实践与体会, in tlladder c日rlo宦[J].J Nutr,2001,131:1067—1070. 2oo4(6):5—7.